|
Title
|
همسانه سازي و بيان ژن آنزيم بتاگلوكاناز از باكتري
E.coli در Pectobacterium carotovorum
|
|
Type
|
Thesis
|
|
Keywords
|
تاگلوكاناز-همسانه سازي-بيان ژن-باكتري پكتوباكتريوم كاروتووروم -اشرشيا كلي
|
|
Abstract
|
زمينه پژوهش:
فناوري آنز يم ها تبد يل به روش ي نوين و كاربرد ي شده است كه توانسته بسياري از مشكالت را حل و باعث بهبود و پيشرفت بسياري از فرآي ندهاي صنعتي، ازجمله توليد مواد دارويي و غذايي بشر شود. در بين آنز يم هاي صنعتي، سلوالزها ، جايگاه
دوم بازار جهاني آنزي م را به خود اختصا ص داده اند. بتاگلوكانازها يكي از انواع سلوالزها هستند، كه سهم عمدهاي از اين باز را به خود اختصاص داده اند . گروه زيادي از پروكاري وت ها و يوكاريوتهاي تك سلولي مانند قارچ ها، اين آنزيم را توليد مي كنند . باكتري carotovorum Pectobacterium يك پاتوژن گياهي است كه آنزيم هاي خارج سلولي قابل توجهي ترشح مي كند كه يكي از آن ها بتاگلوكاناز است. بنابراين، جداسازي ژن بتاگلوكاناز اين باكتري ، و همسانه سازي آن در ميزبان بياني اشيرشيا كلي )1180pSL; b26pET )با هدف ب يان موردتوجه قرار گرفت. مواد و روش ها:
باكتري carotovorum Pectobacterium كشت، DNA ژنوميك آن استخراج و جهت تكثير ژن كد كننده بتاگلوكاناز استفاده شد. سپس اين ژن با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي واجد جايگاه برش، تكثير و به وس ي له آنزيم برش داده شد. به صورت موازي نيز، پالسميد استخراج، و با آنزي م برش داده شد. الحاق ژن بتاگلوكاناز درون پالسميد انجام و سلول ميزبان مستعد، با استفاده از محصول واكنش الحاقي ترانسفورم و روي محيط كشت انتخابي كشت داده شد. پس از اثبات وجود سازه نوتركيب، اين سازه استخراج و سلول ميزبان با استفاده از آن تراريخت شد و بيان بتاگلوكاناز نوترك يب با استفاده از PAGE-SDS بررسي شد.
يافته ها: نتيجه الكتروفورز روي ژل اگارز، آزمايشهاي PCR-Colony و هضم آنزيمي و تعيين توالي نشان داد گه ژن بتاگلوكاناز با موفق يت تكثي ر و در 1180pSL همسانه شده است، اما زير همسانهسازي آن در b26pET موفقيت آميز نبود. نتيجه بالست ترادف نوكلوئيد ي، بيشترين ش باهت را با گونه polaris Pectobacterium نشان داد. ترجمه ترادف بازي به اس يدآمينه و بالست آن داده فوق را تائيد نمود. نتيجه PAGE-SDS بيان س يتوپالسمي ژن فوق را به صورت باند بسيار ضعيفي نشان داد
نتيجه گيري: اين پژوهش در زمينه تكثير و همسانه سازي ژن بتاگلوكاناز گونه carotovorum Pectobacterium در وكتور1180pSL موفق ولي در وكتور b26pET ناموفق بود. بيان ژن بتاگلوكاناز در ميزبان بياني 21BL coli.E بسيار اندك بود.
|
|
Researchers
|
samin sami (Student) , Seyed Javad Hosseini (First primary advisor) , Amir Rahimi (First primary advisor) , Nahal Hadi (Advisor) , Seyed Mohsen Taghavi (Advisor)
|