سیدجواد حسینی

زمینه پژوهش: فناوری آنز یم ها تبد یل به روش ی نوین و کاربرد ی شده است که توانسته بسیاری از مشکالت را حل و باعث بهبود و پیشرفت بسیاری از فرآی ندهای صنعتی، ازجمله تولید مواد دارویی و غذایی بشر شود. در بین آنز یم های صنعتی، سلوالزها ، جایگاه دوم بازار جهانی آنزی م را به خود اختصا ص داده اند. بتاگلوکانازها یکی از انواع سلوالزها هستند، که سهم عمدهای از این باز را به خود اختصاص داده اند . گروه زیادی از پروکاری وت ها و یوکاریوتهای تک سلولی مانند قارچ ها، این آنزیم را تولید می کنند . باکتری carotovorum Pectobacterium یک پاتوژن گیاهی است که آنزیم های خارج سلولی قابل توجهی ترشح می کند که یکی از آن ها بتاگلوکاناز است. بنابراین، جداسازی ژن بتاگلوکاناز این باکتری ، و همسانه سازی آن در میزبان بیانی اشیرشیا کلی )1180pSL; b26pET )با هدف ب یان موردتوجه قرار گرفت. مواد و روش ها: باکتری carotovorum Pectobacterium کشت، DNA ژنومیک آن استخراج و جهت تکثیر ژن کد کننده بتاگلوکاناز استفاده شد. سپس این ژن با استفاده از آغازگرهای اختصاصی واجد جایگاه برش، تکثیر و به وس ی له آنزیم برش داده شد. به صورت موازی نیز، پالسمید استخراج، و با آنزی م برش داده شد. الحاق ژن بتاگلوکاناز درون پالسمید انجام و سلول میزبان مستعد، با استفاده از محصول واکنش الحاقی ترانسفورم و روی محیط کشت انتخابی کشت داده شد. پس از اثبات وجود سازه نوترکیب، این سازه استخراج و سلول میزبان با استفاده از آن تراریخت شد و بیان بتاگلوکاناز نوترک یب با استفاده از PAGE-SDS بررسی شد. یافته ها: نتیجه الکتروفورز روی ژل اگارز، آزمایشهای PCR-Colony و هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد گه ژن بتاگلوکاناز با موفق یت تکثی ر و در 1180pSL همسانه شده است، اما زیر همسانهسازی آن در b26pET موفقیت آمیز نبود. نتیجه بالست ترادف نوکلوئید ی، بیشترین ش باهت را با گونه polaris Pectobacterium نشان داد. ترجمه ترادف بازی به اس یدآمینه و بالست آن داده فوق را تائید نمود. نتیجه PAGE-SDS بیان س یتوپالسمی ژن فوق را به صورت باند بسیار ضعیفی نشان داد نتیجه گیری: این پژوهش در زمینه تکثیر و همسانه سازی ژن بتاگلوکاناز گونه carotovorum Pectobacterium در وکتور1180pSL موفق ولی در وکتور b26pET ناموفق بود. بیان ژن بتاگلوکاناز در میزبان بیانی 21BL coli.E بسیار اندک بود.