مهدی محمدی

اسیدهای چرب غیراشباع بلند زنجیر امگا 3مانند ایکوزاپنتانوئیک اسید (EPA) نقش مهمی را در سلامتی انسان ، دام و آبزیان ایفا می کنند. از جمله منابع خوب تولید کننده اسیدهای چرب غیراشباع ریزجلبک ها می باشند که دارای مسیرهای منحصر به فرد برای تولید دوکوزاهگزانوییک اسید (DHA ) و ایکوزاپنتانوئیک اسید هستند . ریزجلبک Isochrysis یکی از منابع ریزجلبکی، دارای میزان بالایی اسید های چرب بلند زنجیر غیر اشباع است. در مسیر متابولیسمی تولید اسیدهای چرب غیراشباع بلند زنجیر امگا 3و امگا 6، آنزیم دلتا 5 دساچوراز در تبدیل پیش سازهای اولیه آلفالینولئیک اسید و لینولئیک اسید به اسیدچرب بلند زنجیر غیراشباع امگا 3 ایکوزاپنتانوئیک اسید و اسیدچرب بلند زنجیر غیراشباع امگا6 آراشیدونیک اسید نقش دارد. در این تحقیق، در ریزجلبکIsochrysis galbana به شناسایی ژن آنزیم دلتا 5 دساچوراز که مسئول تولید اسید چرب ایکوزاپنتانوئیک اسید و آراشیدونیک اسید می باشد، پرداخته شده است. از این رو برای خالص سازی ریزجلبک مورد نظر از کشت متوالی استفاده شد تا از نبود آلودگی های باکتریایی و قارچی اطمینان حاصل شود. ریزجلبک خالص شده سپس با توالی یابی و BLAST ژن 18srDNA در NCBI، ریزجلبک Isochrysis galbana شناسایی شد. بعد از بهینه سازی شرایط رشد ریزجلبک (8 PH، نور در lux 1500 و شوری مربوط به gr/l 35)، RNA استخراج و cDNA سنتز شد. در مرحله بعد پرایمرهای طراحی شده برای شناسایی ژن آنزیم دلتا 5 دساچوراز. بخشی از آن را تکثیر کردند. در نهایت با توالی یابی محصول PCR و BLAST در GenBank، %99 هم سانی و 97% هم پوشانی با JQ034610.1 Isochrysis galbana داشت. توالی نوکلئیک اسیدی قطعه cDNAباکمک نرم افزار CLC Main Workbench 5.5 به توالی آمینواسیدی تبدیل گردید . توای پپتیدی با توالی آمینو اسیدی آنزیم دلتا 5 دساچوراز در ریزجلبک های دیگر شامل Isochrysis galbana (AFD22890.1 و AEA72469.1) و) Rebecca salina ABL96295.1) موجود در NCBI با استفاده از clustal w2 ، هم ترازی انجام گرفت. شباهت ها و تفاوت هایی دیده شد .نتایج حاصله از هم ترازی ،سه موتیف غنی از هیستیدین مربوط به آنزیم دلتا 5 دساچوراز را با توالی های HEGGH ،HNKHH و QLEHH و همچنین موتیف FA Desaturase نشان داد. . با توجه به . با توجه به اهمیت شناسایی ژن آنزیم ها در مسیر متابولیسمی اسیدهای چرب غیراشباع