امیرحسین احمدی

مقدمه و هدف: استخراج و خالص سازی DNA یکی از موارد مهم در پژوهش های زیست شناسی شناخته شده، زیرا استخراج DNA زمینه انجام آزمایش های پایین دستی را فراهم می نماید. یکی از روش های جدید استخراج DNA را می توان استفاده از نانوذرات مغناطیسی یادآوری نمود. هدف از اجرای این پژوهش نیز سنتز نانوذره مغناطیسی فریت کبالت با پوشش poly ethylene glycol (PEG) و poly ethyene imine (PEI) در استخراج DNA آزاد و ژنومی از رده سلولی adenocarcinoma gastric cell line (AGS) و مقایسه آن با کیت ستونی است. مواد و روش ها: رده سلولی AGS در آزمایشگاه کشت سلول، کشت شد. نانوذره مغناطیسی فریت کبالت توسط روش هیدروترمال از کلریت های آهن و کبالت سنتز و توسط پلیمرهای PEG و PEI پوشش دهی شده، سپس توسط آزمایش های طیف سنجی پراش اشعه ایکس، طیف سنجی فروسرخ تبدیل فوریه، مغناطیس سنج نمونه ارتعاشی و بررسی میکروسکوپ الکترونی روبشی تعیین ویژگی گردید. بعد از بهینه سازی غلظت نانوذرات مغناطیسی فریت کبالت، غلظت مناسب نانوذره برای استخراج DNA مشخص شده، فرایند استخراج DNA با 3 تکرار برای هر نانوذره و کیت ستونی از محیط کشت (برای استخراج DNA آزاد) و رده سلولی AGS (برای استخراج DNA ژنومی) انجام شد. برای بررسی واکنش پذیری DNA استخراج شده توسط نانوذرات و کیت ستونی از آزمایش polymerase chain reaction (PCR) با استفاده از آغازگرهای ژن اکتین و الکتروفورز ژل آگارز استفاده شد. نتایج: نتایج دریافتی از آزمایش های طیف سنجی پراش اشعه ایکس و طیف سنجی فروسرخ تبدیل فوریه بیانگر تشکیل ساختار نانوذره فریت کبالت و پوشش دهی آن توسط پلیمرهای PEG و PEI هستند. تصاویر میکروسکوپ الکترونی روبشی، بیانگر تشکیل ساختار کروی نانوذرات بوده، توزیع اندازه نانوذرات بیان می دارد که میانگین قطر نانوذره فریت کبالت 35/42 نانومتر، نانوذره فریت کبالت با پوشش PEG 15/55 نانومتر و نانوذره فریت کبالت با پوشش PEI 76/60 نانومتر هستند. بادرنظر داشت نتایج بهینه سازی غلظت نانوذره برای استخراج DNA بهترین غلظت نانوذره برای استخراج DNA 320 میکروگرم در میکرولیتر است. میزان DNAژنومی استخراج شده از رده سلولی AGSتوسط نانوذره با پوشش PEI (6/15 میکروگرم در میلی لیتر) نسبت به نانوذره با پوشش PEG (6/19 میکروگرم در میلی لیتر) کمتر بوده، ولی خلوص DNAژنومی استخراج شده از رده سلولی AGS توسط